藥品微生物實驗室規(guī)范指導原則用于指導藥品微生物檢驗實驗室的質量控制。

     藥品微生物的檢驗結果受很多因素的影響，如樣品中微生物可能分布不均勻、微生物檢驗方法的誤差較大等。因此，在藥品微生物檢驗中，為保證檢驗結果的可靠性，必須使用經(jīng)驗證的檢測方法并嚴格按照藥品微生物實驗室規(guī)范要求進行試驗。

     藥品微生物實驗室規(guī)范包括以下幾個方面：人員、培養(yǎng)基、菌種、實驗室的布局和運行、設備、文件、實驗記錄、結果的判斷等。

人員

      從事藥品微生物試驗工作的人員應具備微生物學或相近專業(yè)知識的教育背景。

      實驗人員應依據(jù)所在崗位和職責接受相應的培訓，在確認他們可以承擔某一試驗前，他們不能獨立從事該項微生物試驗。應保證所有人員在上崗前接受勝任工作所必需的設備操作、微生物檢驗技術和實驗室生物安全等方面的培訓，經(jīng)考核合格后方可上崗，同時，實驗室應制定所有級別實驗人員的繼續(xù)教育計劃。

     檢驗人員必須熟悉相關檢測方法、程序、檢測目的和結果評價。微生物實驗室的管理者其專業(yè)技能和經(jīng)驗水平應與他們的職責范圍相符，如：管理技能、實驗室安全、試驗安排、預算、實驗研究、實驗結果的評估和數(shù)據(jù)偏差的調(diào)查、技術報告書寫等。

     實驗室應通過參加內(nèi)部質量控制、能力驗證或使用標準菌株等方法客觀評估檢驗人員的能力，必要時對其進行再培訓并重新評估。當使用一種非經(jīng)常使用的方法或技術時，有必要在檢測前確認微生物檢測人員的操作技能。

      所有人員的培訓、考核內(nèi)容和結果均應記錄歸檔。

培養(yǎng)基

      培養(yǎng)基是微生物試驗的基礎，直接影響微生物試驗結果。適宜的培養(yǎng)基制備方法、貯藏條件和質量控制試驗是提供優(yōu)質培養(yǎng)基的保證。

     1 ．培養(yǎng)基的制備

      培養(yǎng)基可按處方配制，也可使用按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。

      在制備培養(yǎng)基時，應選擇質量符合要求的脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分進行配制。脫水培養(yǎng)基應附有處方和使用說明，配制時應按使用說明上的要求操作以確保培養(yǎng)基的質量符合要求，不得使用結塊或顏色發(fā)生改變的脫水培養(yǎng)基。脫水培養(yǎng)基或單獨配方組分應在適當?shù)臈l件下貯藏，如低溫、干燥和避光，所有的容器應密封，尤其是盛放脫水培養(yǎng)基的容器。商品化的成品培養(yǎng)基除了應附有處方和使用說明外，還應注明有效期、貯藏條件、適用性檢查試驗的質控菌和用途。

      為保證培養(yǎng)基質量的穩(wěn)定可靠，各脫水培養(yǎng)基或各配方組分應準確稱量，并要求有一定的精確度。配制培養(yǎng)基&最&常&用的溶劑是純化水，特殊情況下，可能需要用去離子水和蒸餾水。應記錄各稱量物的重量和水的使用量。

      配制培養(yǎng)基所用容器和配套器具應潔凈，可用純化水沖洗玻璃器皿以消除清潔劑和外來物質的殘留，對熱敏感的培養(yǎng)基如糖發(fā)酵培養(yǎng)基其分裝容器一般應預先進行滅菌，以保證培養(yǎng)基的無菌性。

      脫水培養(yǎng)基應完&全溶解于水中，再行分裝與滅菌。配制時若需要加熱助溶，應注意不要過度加熱，以避免培養(yǎng)基顏色變深。如需要添加其他組分時，加入后充分混勻。應按照生產(chǎn)商提供或使用者驗證的參數(shù)進行培養(yǎng)基的滅菌。商品化的成品培養(yǎng)基必須附有所用滅菌方法的資料。培養(yǎng)基滅菌一般采用濕熱滅菌技術，特殊培養(yǎng)基可采用薄膜過濾除菌。

      培養(yǎng)基若采用不適當?shù)募訜岷蜏缇鷹l件，有可能引起顏色變化、透明度降低、瓊脂凝固力或pH 的改變。因此，培養(yǎng)基應采用驗證的滅菌程序滅菌，培養(yǎng)基滅菌方法和條件，應通過無菌性試驗和促生長試驗進行驗證。此外，對高壓滅菌器的蒸汽循環(huán)系統(tǒng)也要加以驗證，以保證在一定裝載方式下的正常熱分布。溫度緩慢上升的高壓滅菌器可能導致培養(yǎng)基的過熱，過度滅菌可能會破壞絕大多數(shù)的細菌和真菌培養(yǎng)基促生長的質量。滅菌器中培養(yǎng)基的容積和裝載方式也將影響加熱的速度。因此，應根據(jù)滅菌培養(yǎng)基的特性，進行全面的滅菌程序驗證。

      應確定每批培養(yǎng)基滅菌后的pH值（冷卻至室溫25 ℃ 測定）。若培養(yǎng)基處方中未列出pH 值的范圍，除非經(jīng)驗證表明培養(yǎng)基的pH 值允許的變化范圍很寬，否則，pH值的范圍不能超過規(guī)定值士0.2 。

      制成平板或分裝于試管的培養(yǎng)基應進行下列檢查：容器和蓋子不得破裂，裝量應相同，盡量避免形成氣泡，固體培養(yǎng)基表面不得產(chǎn)生裂縫或漣漪，在冷藏溫度下不得形成結晶，不得污染微生物等。應檢查和記錄批數(shù)量、有效期及培養(yǎng)基的無菌檢查。

      2 ．培養(yǎng)基的貯藏

自配的培養(yǎng)基應標記名稱、批號、配制日期等信息，并在已驗證的條件下貯藏。商品化的成品培養(yǎng)基標簽上應標有名稱、批號、生產(chǎn)日期、失效期及培養(yǎng)基的有關特性，生產(chǎn)商和使用者應根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書上的要求進行貯藏，所采用的貯藏和運輸條件應使成品培養(yǎng)基最&低限度的失去水分并提供機械保護。

      培養(yǎng)基滅菌后若貯藏在高壓滅菌器中，質量可能會受影響，一般不提倡這種存放法。瓊脂培養(yǎng)基不得在O ℃ 或O ℃ 以下存放，因為冷凍可能破壞凝膠特性。培養(yǎng)基應避光保存，若要長期保存，應置于密閉容器中以防止水分流失。瓊脂平板最好現(xiàn)配現(xiàn)用，如置冰箱保存，一般不超過1周，且應密閉包裝，若延長保存期限，保存期需經(jīng)驗證確定。

      固體培養(yǎng)基滅菌后的再融化只允許1 次，以避免因過度受熱造成培養(yǎng)基質量下降或微生物污染。培養(yǎng)基的再融化一般采用水浴或流通蒸汽加熱。若使用微波爐，應避免培養(yǎng)基過度受熱及水分的蒸發(fā)，更要注意安全。融化的培養(yǎng)基應置于45 ～50 ℃ 的水浴中，不得超過8 小時。傾注培養(yǎng)基時， 應擦干培養(yǎng)基容器外表面的水分，避免容器外壁的水滴進人培養(yǎng)基中造成污染。

      使用過的培養(yǎng)基（包括失效的培養(yǎng)基）應按照國家污染廢物處理相關規(guī)定進行。

      3 ．質量控制試驗

      實驗室應對試驗用培養(yǎng)基建立質量控制程序，以確保所用培養(yǎng)基質量符合相關檢測的需要。

      實驗室配制或商品化的成品培養(yǎng)基的質量依賴于其制備過程，采用不適宜方法制備的培養(yǎng)基將影響微生物的生長或復蘇，從而影響試驗結果的可靠性。

      所有配制好的培養(yǎng)基均應進行質量控制試驗。實驗室配制的培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目是pH 、適用性檢查試驗，定期的穩(wěn)定性檢查以確定有效期。培養(yǎng)基在有效期內(nèi)應依據(jù)適用性檢查試驗確定培養(yǎng)基質量是否符合要求。有效期的長短將取決于在一定存放條件下（包括容器特性及密封性）的培養(yǎng)基其組成成分的穩(wěn)定性。

      除藥典附錄另有規(guī)定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養(yǎng)基且過程受控，那么同一批脫水培養(yǎng)基的適用性檢查試驗可只進行1 次。如果培養(yǎng)基的制備過程未經(jīng)驗證，那么每一批培養(yǎng)基均要進行適用性檢查試驗，試驗的菌種可根據(jù)培養(yǎng)基的用途從相關附錄中進行選擇，也可增加從生產(chǎn)環(huán)境及產(chǎn)品中常見的污染菌株。

      培養(yǎng)基的質屋控制試驗若不符合規(guī)定，應尋找不合格的原因，以防止問題重復出現(xiàn)。任何不符合要求的培養(yǎng)基均不能使用。

      用于環(huán)境監(jiān)控的培養(yǎng)基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養(yǎng)基，那么在使用前應進行100 ％的預培養(yǎng)以防止外來的污染物帶到環(huán)境中及避免出現(xiàn)假陽性結果。

菌種

      試驗過程中，生物樣本可能是最敏感的，因為它們的活性和特性依賴于合適的試驗操作和貯藏條件。實驗室菌種的處理和保藏的程序應標準化，使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗結果一致性的重要保證。

      藥品微生物檢驗用的試驗菌應來自認可的國內(nèi)或國外菌種保藏機構的標準菌株，或使用與標準菌株所有相關特性等效的商業(yè)派生菌株。

      標準菌株的復活或培養(yǎng)物的制備應按供應商提供的說明或按已驗證的方法進行。從國內(nèi)或國外菌種保藏機構獲得的標準菌株經(jīng)過復活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后，即為標準儲備菌株。標準儲備菌株應進行純度和特性確認。標準儲備菌株保存時，可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中，并分裝于小瓶中，建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍（低于-30 ℃ ）等方法保存。低于-70 ℃ 或低溫冷凍干燥方法可以延長菌種保存時間。標準儲備菌株可用于制備每月或每周1 次轉種的工作菌株。冷凍菌種一旦解凍轉種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用。

       工作菌株的傳代次數(shù)應嚴格控制，不得超過5 代（從菌種保藏機構獲得的標準菌株為第0代），以防止過度的傳代增加菌種變異的風險。1 代是指將活的培養(yǎng)物接種到微生物生長的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，任何亞培養(yǎng)的形式均被認為是轉種或傳代1 次。必要時，實驗室應對工作菌株的特性和純度進行確認。

       工作菌株不可替代標準菌株，標準菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。

       實驗室必須建立和保存其所有菌種的進出、收集、貯藏、確認試驗以及銷毀的記錄，應有菌種管理的程序文件（從標準菌株到工作菌株），該程序包括：標準菌種的申購記錄；從標準菌株到工作菌株操作及記錄，菌種必須定期轉種傳代，并做純度、特性等實驗室所需關鍵指標的確認，并記錄；每支菌種都應注明其名稱、標準號、接種日期、傳代數(shù)；菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件；菌種保藏的位置和條件；其他需要的程序。

實驗室的布局和運行

      實驗室應具有進行微生物檢測所需的適宜、充分的設施條件。實驗室的布局與設計應充分考慮到良好微生物實驗室操作規(guī)范和實驗室安全的要求。實驗室布局設計的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗過程對環(huán)境和人員造成危害?；顒訁^(qū)域的合理規(guī)劃及區(qū)分將提高微生物實驗室操作的可靠性。

      通常，實驗室應劃分成相應的潔凈區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時應根據(jù)試驗目的，在時間或空間上有效分隔不相容的試驗活動，將交叉污染的風險降低到最&低